Liquid chromatography bụ isi ụzọ iji nwalee ọdịnaya nke akụkụ ọ bụla na adịghị ọcha na akụrụngwa, intermediates, nkwadebe na ihe nkwakọ ngwaahịa, mana ọtụtụ ihe enweghị usoro ọkọlọtọ ịdabere na ya, yabụ na ọ bụ ihe a na-apụghị izere ezere ịzụlite ụzọ ọhụrụ. Na mmepe nke usoro mmiri mmiri, kọlụm chromatographic bụ isi nke chromatography mmiri, yabụ otu esi ahọrọ kọlụm chromatographic kwesịrị ekwesị dị oke mkpa. N'isiokwu a, onye edemede ga-akọwa otu esi ahọrọ kọlụm chromatography nke mmiri mmiri site na akụkụ atọ: echiche zuru oke, echiche na njedebe ngwa.
A. N'ozuzu echiche maka ịhọrọ ogidi chromatography mmiri mmiri
1. Nyochaa njirimara anụ ahụ na nke kemịkalụ nke nyocha: dị ka usoro kemịkalụ, solubility, nkwụsi ike (dịka ma ọ dị mfe oxidized / belata / hydrolyzed), acidity na alkalinity, wdg, karịsịa nhazi kemịkalụ bụ isi ihe. ihe na-achọpụta ihe ndị dị na ya, dị ka ndị na-ejikọta ọnụ nwere ike ịmịnye ultraviolet na ike ọkụ;
2. Kpebisie ike na ebumnuche nke nyocha: ma ọ bụ nkewa dị elu, arụmọrụ kọlụm dị elu, oge nyocha nkenke, mmetụta dị elu, nrụgide nrụgide dị elu, ogologo ndụ kọlụm, ọnụ ala, wdg chọrọ;
- Họrọ kọlụm chromatographic dabara adaba: ghọta ihe mejupụtara, ihe anụ ahụ na kemịkalụ nke chromatographic filler, dị ka nha nha, nha pore, nnabata okpomọkụ, nnabata pH, mgbasa ozi nke nyocha, wdg.
- Atụmatụ maka ịhọrọ ogidi chromatography mmiri mmiri
Isi nke a ga-atụle ihe ndị a ga-atụle mgbe ị na-ahọrọ kọlụm chromatography site n'echiche nke anụ ahụ na kemịkal nke kọlụm chromatography n'onwe ya. 2.1 Filler matriks
2.1.1 Silica gel matrix Ihe nkpuchi nke ọtụtụ kọlụm chromatography mmiri bụ silica gel. Ụdị ndochi a nwere ịdị ọcha dị elu, ọnụ ala dị ala, ike ọrụ dị elu, ọ dịkwa mfe ịgbanwe otu (dị ka phenyl bonding, amino bonding, cyano bonding, wdg), mana uru pH na oke okpomọkụ ọ na-anabata nwere oke: na Oke pH nke ọtụtụ silica gel matrix fillers bụ 2 ruo 8, mana ụdị pH nke ụdị silica gel agbakwunyere pụrụ iche nwere ike ịdị obosara dịka 1.5 ruo 10, yana enwekwara ụdị nke silica gel gbanwetụrụ pụrụ iche nke kwụsiri ike na pH dị ala, dị ka Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, nke kwụsiri ike na pH 1 ruo 8; oke okpomọkụ nke silica gel matrix na-abụkarị 60 ℃, na ụfọdụ kọlụm chromatography nwere ike ịnagide okpomọkụ nke 40 ℃ na pH dị elu.
2.1.2 Polymer matrix Polymer fillers na-abụkarị polystyrene-divinylbenzene ma ọ bụ polymethacrylate. Uru ha bụ na ha nwere ike ịnagide pH dị iche iche - enwere ike iji ha mee ihe na 1 ruo 14, ha na-eguzogidekwa okpomọkụ dị elu (nwere ike iru n'elu 80 Celsius C). E jiri ya tụnyere silica dabeere na C18 fillers, ụdị ndochi a nwere hydrophobicity siri ike, na macroporous polymer na-arụ ọrụ nke ọma n'ịkewa ihe atụ dịka protein. Ọdịmma ya bụ na arụmọrụ kọlụm dị ala yana ike arụ ọrụ adịghị ike karịa nke ndị na-ejuputa silica. 2.2 Udi ihe
Ọtụtụ ihe nchacha HPLC ọgbara ọhụrụ bụ irighiri okirikiri, mana mgbe ụfọdụ ha na-abụ ụmụ irighiri ihe mgbe niile. Spherical ahụ nwere ike inye nrụgide kọlụm dị ala, arụmọrụ kọlụm dị elu, nkwụsi ike na ogologo ndụ; mgbe ị na-eji usoro mkpanaaka nke viscosity dị elu (dị ka phosphoric acid) ma ọ bụ mgbe ngwọta ihe nlele ahụ bụ viscous, ihe ndị na-adịghị ahụkebe na-enwe ebe dị elu nke ukwuu, nke na-eme ka ọrụ zuru ezu nke akụkụ abụọ ahụ, na ọnụahịa dị ntakịrị. 2.3 nha nha
Obere urughuru nha, nke dị elu na kọlụm arụmọrụ na elu nkewa, ma njọ nke elu nsogbu nguzogide. Kọlụm a na-ejikarị eme ihe bụ kọlụm nha 5 μm; Ọ bụrụ na ihe nkewa ahụ dị elu, enwere ike ịhọrọ ihe mkpuchi 1.5-3 μm, bụ nke na-enyere aka dozie nsogbu nkewa nke ụfọdụ matrix dị mgbagwoju anya na ihe atụ nke ọtụtụ ihe. UPLC nwere ike iji 1.5 μm fillers; A na-ejikarị 10 μm ma ọ bụ nnukwu urughuru nha ihe na-eme ihe maka ọkara nkwadebe ma ọ bụ ogidi nkwadebe. 2.4 Carbon ọdịnaya
Ọdịnaya carbon na-ezo aka n'oke akụkụ nke njikọ chiri anya n'elu gel silica, nke metụtara mpaghara elu a kapịrị ọnụ yana mkpuchi oge jikọtara ọnụ. Ọdịnaya carbon dị elu na-enye ikike kọlụm dị elu na mkpebi dị elu, a na-ejikarị ya maka ihe atụ dị mgbagwoju anya na-achọ oke nkewa, ma n'ihi ogologo oge mmekọrịta dị n'etiti akụkụ abụọ ahụ, oge nyocha dị ogologo; Ogidi chromatographic dị ala nke carbon nwere oge nyocha dị mkpụmkpụ ma nwee ike igosi nhọrọ dị iche iche, a na-ejikarị ya eme ihe maka ihe atụ dị mfe nke chọrọ nyocha ngwa ngwa na ihe nlele nke chọrọ ọnọdụ aqueous dị elu. Na mkpokọta, carbon ọdịnaya nke C18 sitere na 7% ruo 19%. 2.5 Ogo pore na mpaghara elu akọwapụtara
Mgbasa ozi mgbasa ozi HPLC bụ irighiri akwara, na ọtụtụ mmekọrịta na-ewere ọnọdụ na pores. Ya mere, ụmụ irighiri ihe ga-abanye n'oghere ndị a ga-agbakọta ma kewaa.
Ogo pore na mpaghara elu akọwapụtara bụ echiche abụọ na-akwado. Obere pore nha pụtara nnukwu ebe elu akọwapụtara, yana ọzọ. Nnukwu ebe dị elu nwere ike ime ka mmekọrịta dị n'etiti ụmụ irighiri ihe nlere anya na usoro nke jikọtara ọnụ, kwalite njide, na-abawanye ntinye nlele na ikike kọlụm, na nkewa nke ihe mgbagwoju anya. Ihe ndochi zuru oke bụ nke ụdị ndochi a. Maka ndị nwere oke nkewa chọrọ, a na-atụ aro ka ịhọrọ ihe ndochi nwere nnukwu ebe dị elu; Obere ebe dịpụrụ adịpụ nwere ike ibelata nrụgide azụ, melite arụmọrụ kọlụm, ma belata oge nha anya, nke kwesịrị ekwesị maka nyocha gradient. Ihe ndochi isi-shell bụ nke ụdị ndochi a. N'ihe gbasara ijide n'aka nkewa, a na-atụ aro ka ịhọrọ ndị na-ejuputa na obere ebe a kapịrị ọnụ maka ndị nwere nnukwu nyocha arụmọrụ chọrọ. 2.6 Olu pore na ike igwe
Olu pore, nke a makwaara dị ka “ụda pore”, na-ezo aka n'ịdị nha nke ụda efu n'otu akụkụ. Ọ nwere ike na-egosipụta nke ọma ike n'ibu nke ndochi. The n'ibu ike nke fillers na nnukwu pore olu bụ ubé adịghị ike karịa nke fillers na obere pore olu. A na-ejikarị ihe ndị nwere pore olu na-erughị ma ọ bụ hà 1.5 ml / g maka nkewa HPLC, ebe a na-eji ihe ndị nwere pore olu karịrị 1.5 mL / g maka chromatography mwepu molecular na chromatography dị ala. 2.7 Ọnụ ego
Capping nwere ike ibelata ọnụ ọgụgụ ọdụdụ nke sitere na mmekọrịta dị n'etiti ogige na otu silanol ekpughere (dịka njikọ ionic n'etiti ogige alkaline na otu silanol, ndị agha van der Waals na njikọ hydrogen n'etiti ogige acidic na otu silanol), si otú a na-emezi arụmọrụ kọlụm na ọdịdị dị elu. . Usoro ejikọtaghị ọnụ ga-emepụta nhọrọ dị iche iche n'ihe metụtara usoro agbakwunyere, ọkachasị maka nlele pola.
- Ngwa nke kọlụm chromatography mmiri dị iche iche
Isiakwụkwọ a ga-akọwa oke ngwa nke ụdị kọlụm chromatography mmiri dị iche iche site na ụfọdụ.
3.1 kọlụm chromatographic C18 tụgharịa
Kọlụm C18 bụ kọlụm na-agbanwe agbanwe nke a na-ejikarị eme ihe, nke nwere ike izute ọdịnaya na nyocha adịghị ọcha nke ọtụtụ ihe ndị na-emepụta ihe, yana ọdabara na ọkara-polar, polar na-adịghị ike na ihe ndị na-abụghị polar. Ekwesịrị ịhọrọ ụdị na nkọwapụta nke kọlụm chromatographic C18 dị ka ihe achọrọ nkewa siri dị. Dịka ọmụmaatụ, maka ihe ndị nwere oke nkewa chọrọ, a na-ejikarị nkọwa 5 μm * 4.6 mm * 250 mm; Maka ihe ndị nwere matrices nkewa dị mgbagwoju anya na polarity yiri ya, enwere ike iji nkọwa 4 μm * 4.6 mm * 250 mm ma ọ bụ nha nha nha. Dịka ọmụmaatụ, onye odee jiri kọlụm 3 μm*4.6mm*250 mm chọpụta adịghị ọcha genotoxic abụọ na celecoxib API. Nkewa nke ihe abụọ ahụ nwere ike iru 2.9, nke dị mma. Tụkwasị na nke ahụ, n'okpuru nhazi nke iji hụ na nkewa, ọ bụrụ na achọrọ nyocha ngwa ngwa, a na-ahọrọkarị kọlụm dị mkpirikpi nke 10 mm ma ọ bụ 15 mm. Dịka ọmụmaatụ, mgbe onye edemede jiri LC-MS/MS chọpụta adịghị ọcha genotoxic na piperaquine phosphate API, a na-eji kọlụm 3 μm * 2.1 mm * 100 mm mee ihe. Nkewa dị n'etiti adịghị ọcha na isi ihe bụ 2.0, na nchọpụta nke ihe nlele nwere ike mechaa na 5 nkeji. 3.2 kọlụm phenyl agbaghachi azụ
Kọlụm Phenyl bụkwa ụdị kọlụm ntughari. Ụdị kọlụm a nwere nhọrọ siri ike maka ogige aromatic. Ọ bụrụ na nzaghachi nke ogige aromatic tụrụ site na kọlụm C18 nkịtị adịghị ike, ị nwere ike ịtụle iji dochie kọlụm phenyl. Dịka ọmụmaatụ, mgbe m na-eme celecoxib API, mmeghachi omume bụ isi nke a tụrụ site na kọlụm phenyl nke otu onye nrụpụta na otu nkọwapụta (niile 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) bụ ihe dị ka okpukpu 7 karịa nke kọlụm C18. 3.3 Kọlụm-usoro nkịtị
Dị ka ihe mgbakwunye dị irè na kọlụm ntụgharị-na-agbanwe, kọlụm-usoro nkịtị dabara adaba maka ogige pola nke ukwuu. Ọ bụrụ na ọnụ ọgụgụ kasị elu ka dị nnọọ ngwa ngwa mgbe eluting na ihe karịrị 90% aqueous usoro na reverse-phase kọlụm, na ọbụna nso na overlaps na ihe mgbaze kasị elu, ị nwere ike tụlee dochie nkịtị-phase kọlụm. Ụdị kọlụm a gụnyere kọlụm hilic, kọlụm amino, kọlụm cyano, wdg.
3.3.1 Hilic kọlụm Hilic kọlụm na-etinyekarị otu hydrophilic n'agbụ alkyl jikọtara ọnụ iji kwalite nzaghachi na ihe pola. Ụdị kọlụm a kwesịrị ekwesị maka nyocha nke ihe shuga. Onye edemede na-eji ụdị kọlụm a mgbe ọ na-eme ọdịnaya na ihe ndị metụtara ya nke xylose na ihe ndị ọzọ. A nwekwara ike kewapụ ndị isomers nke ihe xylose nke ọma;
3.3.2 Amino kọlụm na cyano kọlụm Amino kọlụm na cyano kọlụm na-ezo aka na ntinye nke amino na cyano mgbanwe na njedebe nke bonded alkyl yinye, n'otu n'otu, iji melite selectivity maka pụrụ iche bekee: dịka ọmụmaatụ, amino kọlụm bụ ezigbo nhọrọ. maka nkewa nke sugars, amino acids, bases na amides; kọlụm cyano nwere nhọrọ ka mma mgbe ị na-ekewa ihe ndị yiri ya na hydrogenated na enweghị mmiri n'ihi ọnụnọ nke njikọ jikọtara ọnụ. Enwere ike ịgbanwee kọlụm Amino na kọlụm cyano n'etiti kọlụm nkeji nkịtị na kọlụm nkeji azụ, mana akwadoghị ịgbanye oge niile. 3.4 Kọlụm Chiral
Kọlụm Chiral, dị ka aha ahụ na-egosi, kwesịrị ekwesị maka nkewa na nyocha nke ogige chiral, karịsịa n'ọhịa nke ọgwụ. Enwere ike ịtụle ụdị kọlụm a mgbe usoro ntụgharị oge na ogidi ndị nkịtị enweghị ike nweta nkewa nke isomers. Dịka ọmụmaatụ, onye edemede ahụ jiri kọlụm chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm kewaa isomers abụọ nke 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine na (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, na nkewa n'etiti abụọ ruru banyere 2.0. Agbanyeghị, kọlụm chiral dị ọnụ karịa ụdị ogidi ndị ọzọ, na-abụkarị 1W +/ibe. Ọ bụrụ na ọ dị mkpa maka ogidi ndị dị otú ahụ, unit ahụ kwesịrị ime mmefu ego zuru oke. 3.5 ion mgbanwe kọlụm
Ogidi mgbanwe ion dabara adaba maka nkewa na nyocha nke ion ebubo, dị ka ion, protein, acid nucleic, na ụfọdụ ihe ndị dị na shuga. Dị ka ụdị ndochi ahụ si dị, a na-ekewa ha na kọlụm mgbanwe cation, ogidi mgbanwe anion, na ogidi mgbanwe cation siri ike.
Ogidi mgbanwe cation gụnyere ogidi ndị dabeere na calcium na hydrogen, bụ ndị dabara adaba maka nyocha nke ihe cationic dị ka amino acids. Dịka ọmụmaatụ, onye na-ede akwụkwọ na-eji ogidi ndị dabeere na calcium mgbe ọ na-enyocha calcium gluconate na calcium acetate na ngwọta na-egbuke egbuke. Ihe abụọ a nwere nzaghachi siri ike na λ = 210nm, na ogo nkewa ruru 3.0; onye edemede ahụ jiri ogidi ndị dabeere na hydrogen mgbe ọ na-enyocha ihe ndị metụtara glucose. Ọtụtụ ihe ndị metụtara isi - maltose, maltotriose na fructose - nwere mmetụta dị elu n'okpuru ihe nchọpụta dị iche iche, na njedebe nchọpụta dị ka 0.5 ppm na ogo nkewa nke 2.0-2.5.
Ogidi mgbanwe anion na-adabara nke ọma maka nyocha nke ihe anionic dị ka organic acid na halogen ion; ogidi mgbanwe cation siri ike nwere ikike mgbanwe ion dị elu na selectivity, ma dabara maka nkewa na nyocha nke ihe atụ dị mgbagwoju anya.
Nke a dị n'elu bụ naanị mmalite nke ụdị na ngwa ngwa nke ọtụtụ kọlụm chromatography mmiri na-ahụkarị jikọtara ya na ahụmịhe onye ode akwụkwọ nwere. Enwere ụdị ogidi chromatographic ndị ọzọ pụrụ iche na ngwa n'ezie, dị ka kọlụm chromatographic buru ibu, obere ogidi chromatographic obere, kọlụm chromatography nke mmekọrịta, kọlụm chromatographic multimode, kọlụm ultra-high arụmọrụ mmiri chromatography ogidi (UHPLC), kọlụm chromatography mmiri na-enweghị atụ ( SFC), wdg Ha na-arụ ọrụ dị mkpa na mpaghara dị iche iche. A ga-ahọrọ ụdị kọlụm chromatographic kpọmkwem dị ka nhazi na njirimara nke ihe nlele ahụ, ihe nkewa chọrọ na ebumnuche ndị ọzọ.
Oge nzipu: Jun-14-2024